温泉水嗜热菌耐热性测试

点击：94丨发布时间：2025-08-09 10:09:41丨关键词：CMA/CNAS/ISO资质，中析研究所，温泉水嗜热菌耐热性测试

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参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

CMA/CNAS等证书详情，因时间等不可抗拒因素会发生变更，请咨询在线工程师。

检测项目

耐热极限检测：

• 最高生长温度（Tmax/℃，参照ISO 10718）、致死温度（10分钟内99%菌体死亡的温度，±1℃）
• 亚致死温度阈值（生长速率下降50%的温度，℃，梯度测试范围50℃-120℃）

• 100℃静态热暴露存活时间（h，每2小时取样计数）、50℃-120℃梯度热冲击存活率（%，每10℃递增，处理时间10分钟）
• 反复热循环稳定性（80℃-25℃循环10次后的存活比例，%）

• ATP合成速率（μmol/L·min，37℃对照 vs 80℃处理）、葡萄糖 uptake速率（nmol/(mg蛋白·h)，85℃下保持率≥50%）
• 乳酸发酵速率（mmol/(L·h)，90℃下比37℃下降≤70%）

• 嗜热蛋白酶残留活性（%，100℃处理30分钟，参照GB/T 23527）、DNA聚合酶（Taq酶同源物）半衰期（min，95℃）
• α-淀粉酶热稳定性（%，110℃处理15分钟，碘量法测定）

• 胞内K+泄漏率（%，80℃下1小时，火焰光度计法）、细胞膜流动性（荧光偏振度，DPH探针检测，温度范围50℃-100℃）
• 细胞膜脂过氧化程度（MDA含量，nmol/mg蛋白，85℃下上升倍数≤2）

• HSP70 mRNA相对表达量（80℃ vs 60℃，qPCR检测，阈值循环数差≤3）、HSP90蛋白含量（μg/mg总蛋白，热胁迫后上升倍数≥2）
• σ32因子（热休克启动子结合蛋白）活性（%，90℃下保持率≥40%）

• 双链断裂（DSB）修复效率（%，γ-H2AX免疫荧光检测，95℃处理30分钟后24小时修复率）
• 胸腺嘧啶二聚体去除率（%·h，紫外线+90℃协同处理，参照ISO 21150）
• RecA蛋白（重组修复关键酶）表达量（ng/mg蛋白，热损伤后上升倍数≥3）

• 比生长速率（μ/h，80℃最适温度，误差≤0.02）、代时（G/h，90℃下延长倍数≤2）
• 最大生物量（OD600，85℃下达到时间≤48小时）

• 胞外多糖粘度保持率（%，100℃处理1小时，旋转粘度计法）、高温蛋白酶（extracellular）活性半衰期（h，90℃）
• 脂多糖（LPS）热解聚率（%，120℃处理30分钟，凝胶电泳法）

• 16S rRNA基因热适应位点突变（如C→T转换，频率≥1%，测序法验证）
• 热休克启动子（σ32结合位点）序列保守性（≥90%同源性，比对E.coli σ32结合序列）
• groEL基因（伴侣蛋白编码基因）拷贝数（≥2拷贝，qPCR检测）

检测范围

1. 温泉水嗜热菌纯培养物： 涵盖硫化叶菌属（Sulfolobus solfataricus）、嗜热杆菌属（Thermus aquaticus），重点检测耐热极限温度与胞内酶热稳定性

2. 高温温泉沉积物菌群： 包含厌氧嗜热菌（如热袍菌属Thermotoga maritima），侧重热胁迫代谢活性与群落结构稳定性（16S rRNA测序分析）

3. 嗜热菌酶制剂粗提物： 如温泉来源的纤维素酶、蛋白酶、DNA聚合酶，重点检测胞内酶残留活性（100℃处理30分钟）与半衰期

4. 高温废水处理工程菌： 人工构建的嗜热菌 consortium（如Thermus+Clostridium），侧重热适应性遗传标记与生长动力学（90℃下代时）

5. 嗜热菌生物肥料菌株： 如固氮嗜热菌（Azotobacter thermophilus），重点检测高温下固氮酶活性保持率（80℃下≥30%）

6. 温泉旅游区水体微生物： 自然菌群（包括嗜热球菌属），侧重热稳定性评估（100℃下存活时间）与DNA热损伤修复能力

7. 嗜热菌基因工程菌株： 如表达Taq酶的大肠杆菌工程菌（E.coli BL21/pET-Taq），重点检测异源酶热稳定性（95℃半衰期）与细胞存活时间

8. 高温发酵原料菌群： 如酿酒厂高温酒糟菌群（含嗜热酵母），侧重胞外分泌物热稳定性（胞外多糖粘度）与代谢活性（葡萄糖 uptake速率）

9. 温泉生物膜菌群： 附着于岩石表面的嗜热菌群落（如Sulfolobus acidocaldarius生物膜），重点检测细胞膜热完整性（K+泄漏率）与群落抗热冲击能力（50℃-120℃梯度存活率）

10. 嗜热菌环境样本： 如火山口温泉水（温度≥90℃）、深海热液喷口菌群（如Methanocaldococcus jannaschii），侧重最高生长温度（Tmax）与热适应性遗传标记（groEL拷贝数）

检测方法

国际标准：

• ISO 10718:2019 嗜热菌生长温度范围测定（采用梯度温度摇床培养，温度精度±0.5℃）
• ASTM D5546-20 水和废水微生物耐热性试验（静态热暴露法，存活计数采用平板涂布法）
• ISO 21150:2019 微生物DNA损伤与修复检测（γ-H2AX免疫荧光法，适用于DNA双链断裂修复效率评估）

• GB/T 38481-2020 嗜热菌检测方法 总则（要求使用恒温培养箱结合浊度法测定生长速率，温度均匀度≤0.5℃）
• GB/T 23527-2009 蛋白酶制剂活性测定（福林酚法，适用于胞内/胞外蛋白酶活性检测）
• GB/T 19495.5-2018 微生物检测 实时定量PCR法（用于HSP70 mRNA表达量检测，荧光通道≥4个）

检测设备

1. 梯度温度摇床： THZ-300C（温度范围20℃-150℃，梯度差±0.5℃，震荡速率100-300rpm，容量300mL×6瓶）

2. 恒温培养箱： HPX-9052MBE（温度精度±0.1℃，均匀度≤0.5℃，容量50L，带湿度控制（30%-90%RH））

3. 荧光分光光度计： F-7000（激发波长200-800nm，发射波长200-900nm，检测限0.1nmol/L，带温度控制模块（20℃-80℃））

4. 实时定量PCR仪： StepOnePlus（荧光通道4个，检测灵敏度10 copies/μL，温度精度±0.1℃，支持多重PCR）

5. 微生物细胞计数仪： Countess II（计数范围1×10^4-1×10^7 cells/mL，误差≤5%，支持活死细胞染色（PI/Calcein-AM））

6. 差示扫描量热仪： DSC-60（温度范围-100℃-500℃，升温速率0.1-100℃/min，分辨率0.1μW，用于细胞膜热相变温度测定）

7. 高效液相色谱仪： Agilent 1260（柱温箱温度范围5℃-80℃，流速0.1-10 mL/min，检测限0.01μg/mL，配备紫外（UV）与荧光检测器）

8. 激光共聚焦显微镜： LSM 710（放大倍数100-630×，荧光通道4个，分辨率0.1μm，支持活细胞实时成像（温度控制37℃-100℃））

9. ATP测定仪： lumac M5000（检测范围10^-12-10^-6 mol/L，误差≤2%，采用荧光素-荧光素酶法，适用于热胁迫下ATP合成速率检测）

10. 热循环仪： Bio-Rad C1000（温度范围4℃-99℃，升温速率3℃/s，模块均一性±0.5℃，支持96孔板与384孔板）

11. 细胞膜流动性分析仪： FluoroMax-4（偏振度检测范围0-1，温度控制精度±0.1℃，配备DPH（1,6-二苯基-1,3,5-己三烯）荧光探针）

12. 蛋白电泳系统： Mini-PROTEAN Tetra（电压范围30-300V，电流范围0.01-0.4A，分辨率1kDa，支持SDS-PAGE与Western Blot（检测HSP70/HSP90蛋白））

13. 气相色谱仪： GC-2010（柱温箱温度范围-10℃-450℃，检测限0.001ppm，流速精度±1%，配备火焰离子化检测器（FID）与热导检测器（TCD））

14. 基因测序仪： Illumina MiSeq（读长2×300bp，产量15-25Gb，误差率0.1%，用于16S rRNA基因测序与热适应性突变分析）

15. 热休克处理装置： 定制化热冲击仪（温度范围40℃-130℃，处理时间1s-60min，精度±0.5℃，支持液体样本与固体样本（如沉积物）处理）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。